光明網訊(記者 宋雅娟 張蕃) 近日,中國農業(yè)科學院農業(yè)質量標準檢測技術研究所畜產品質量安全創(chuàng)新團隊圍繞高值乳品鑒別開發(fā)了一系列快速、定量和多重檢測方法,為高值乳品市場監(jiān)管提供了技術支撐。相關研究成果發(fā)表在《食品化學(Food Chemistry)》、等期刊上。
據陳愛亮研究員介紹,近年來,隨著我國乳制品行業(yè)的快速發(fā)展,市場上出現(xiàn)了許多高值乳品,如山羊奶、牦牛奶、駱駝奶、馬奶、A2牛奶等。這些高值乳品有著更豐富的營養(yǎng)元素、獨特的風味以及保健作用等。因此,開發(fā)高值乳品鑒別方法對于保護消費者權益、保障人民生命健康十分必要。。
針對不同物種乳品的現(xiàn)場快速鑒別需求,針對線粒體種屬特異性基因設計擴增引物,開發(fā)了牦牛奶等重組酶聚合酶-核酸試紙條快速檢測技術,該方法無需PCR等復雜儀器,只需要簡單水浴或體溫加熱即可完成,配合團隊開發(fā)的乳品DNA快速提取方法,可以在40分鐘內完成牦牛奶的鑒定。同時為了符合農業(yè)領域檢測低成本的要求,團隊設計了基于C3終止加尾引物,避免了現(xiàn)有核酸試紙條技術中昂貴抗原抗體的使用,同時還提高了檢測效率。
圖1牦牛奶鑒定試紙條原理示意圖
為了解決液態(tài)奶樣品摻假定量檢測的問題,團隊開發(fā)了基于單拷貝核基因作為標志物,利用特異性基因與參考基因熒光定量PCR檢測的Ct值之比,推斷液態(tài)奶樣品中待檢牛奶占總牛奶的含量,分別建立了驢奶、駱駝奶的含量測定方法。該方法無需預先知道摻假乳品種類,一次分析即可確定高值奶的純度,避免傳統(tǒng)PCR方法因為沾染可能造成誤判的現(xiàn)象,也為根據摻假程度進行合理執(zhí)法提供了技術依據。
圖2駱駝奶樣品純度檢測標準曲線
圍繞高值奶多重鑒別,團隊還開發(fā)了基于實時熒光LAMP技術的微流控芯片產品。通過提前將各物種奶環(huán)介導等溫擴增引物固定到芯片上,檢測時只需要把提取DNA加到芯片上,通過上機檢測,可在90分鐘完成多個樣品多個指標的同時檢測。
圖3實時熒光LAMP微流控芯片用于高值乳品多重鑒別
此外,圍繞乳企A2奶牛選育和市場A2乳品鑒別的需求,團隊針對CSN基因突變位點,設計一對可以分別特異擴增A2和A1基因的PCR引物,同時設計了牛內參引物作為方法質控對照,利用ARMS-PCR技術,成功開發(fā)了A2奶牛鑒定和A2牛奶鑒別的熒光定量PCR試劑盒。
圖4 A1A2牛奶雙重鑒別擴增曲線及對比測序結果圖。
據了解,上述研究得到“十三五”國家重點研發(fā)計劃等項目資助。
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